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蜂蜜中氯霉素的檢測說明

更新時間:2014-06-09      點擊次數:4743

  目前的氯霉素等抗生素快速檢測,主要有酶聯免疫法(ELISA)和膠體金免疫層析法。
  膠體金法的特點是快速、簡單,無需實驗室器材和專業的操作人員,前處理簡單,結果直觀,常溫保存。國內有很多的廠家均有生產,比如上海快靈,北京六角體等。現已廣泛應用于國內各大企業。
  膠體金法只需將處理好的樣品加入稀釋液,攪拌均勻,將混合好的檢測液滴入檢測卡中,5~10分鐘即可根據卡上的出線情況判讀結果。
  ELISA法反應原理 
  主要是利用抗原與抗體的特異性免疫化學反應的基本原理來進行的。在整個反應當中,樣品中氯霉素含量越多,反應呈色就越淡。反之,樣品中氯霉素含量越少,則呈色越深。 
  試劑盒組成 
  1、微量測試孔:每條8孔,每板12條 
  2、氯霉素標準溶液: 
  0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35 ppb、4.05 ppb,1.5ml/瓶 
  3、10倍濃縮萃取稀釋液:一瓶,30ml/瓶 
  4、10倍濃縮洗滌液:一瓶,30 ml /瓶 
  5、氯霉素酶標記物: 一瓶,8 ml/瓶 
  6、底物溶液:一瓶,12 ml/瓶 
  7、反應終止液:一瓶,13 ml/瓶 
  使用說明 
  A、注意事項 
  1、使用前先將氯霉素標準溶液6瓶,濃縮萃取稀釋液,濃縮洗滌液,酶標記物,底物溶液及微量測試孔條置于室溫下,回溫30分鐘。 
  2、原倍萃取稀釋液及洗滌液配制 
  用蒸餾水將10倍濃縮萃取稀釋液及濃縮洗滌液分別以1: 9的比例稀釋(即1mL濃縮液+9mL蒸餾水),即可作為樣品萃取稀釋液與微孔板清洗液。 
  3、回溫后,取出所需微量測試孔條,將剩余板條立即放回鋁箔袋中用膠帶封好,置于4o℃保存。 
  B、樣品制備 
  1.待測物為生乳,則依以下方法進行處理 (5倍稀釋) 
  取100ul待測生乳加入400ul萃取稀釋液,振蕩混合后備用。 
  2.待測物為蜂蜜,則依以下方法進行處理 
  a.取2g蜂蜜、4ml蒸餾水與2ml 乙酸乙酯置入離心管中,震蕩約5分鐘,使其充分混合均勻。 
  b.離心10分鐘(3000rpm),取0.5ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中,于50℃下氮氣吹干(溫度請勿超過50oC)。 
  c.加入0.5ml萃取稀釋液,震蕩約10秒鐘后備用。 
  3. 待測物為血清、則依以下方法進行處理 
  a.抽取待檢動物血液,離心或靜置取其較透明之上層液(血清層)使用,注意不要有溶血。 
  b.將3ml血清加入離心管中,再加入6ml乙酸乙酯,震蕩混合約30秒。 
  c.離心10分鐘(3000rpm),取2ml上層液(乙酸乙酯)至玻璃管中,于50oC下氮氣吹干。 
  d.于此玻璃管中加入正己烷2ml,先將殘余物*溶解后,再加入1 ml萃取稀釋液,震蕩約30秒鐘。 
  e. 離心10分鐘(3000 rpm),用吸管吸去上層液(正己烷) 及中間乳化層部分,棄掉。再吸取下層液(水層)備用。 
  f.若有乳化現象,請先將大部分上層液(正己烷)取出后,再將玻璃管置入80oC水中,隔水加熱約5~10分鐘,可改善乳化情形。 
  4. 待測物為雞肉或魚、蝦,則依以下方法進行處理 
  a.將3克樣品剪碎后放入50 ml離心管中,再加入6ml乙酸乙酯,并以均質機均質約1分鐘,再震蕩約30秒。 
  b.離心10分鐘(3000rpm),取2ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中,于50oC下氮氣吹干。 
  c.于此玻璃管中加入正己烷2 ml,先將殘余物*溶解后(若未能*溶解,可能會導致回收率降低),再加入1 ml萃取稀釋液,震蕩約30秒鐘。 
  d.離心10分鐘(3000 rpm),用吸管吸去上層液(正己烷) 及中間乳化層部分,棄掉。再吸取下層液(水層)備用。 
  e.若有乳化現象,請先將大部分上層液(正己烷)取出后,再將玻璃管置入80oC水中,隔水加熱約5~10分鐘,可改善乳化情形。待測物為血清、則依以下方法進行處理 
  5.待測物為內臟(肝、心等),則依以下方法進行處理(5倍稀釋) 
  同上述步驟a~d,但下層液吸出后,再以萃取稀釋液稀釋5倍(即下層液50ul加萃取稀釋液200ml)。 
  6.待測物為飼料,則依以下方法進行處理(10倍稀釋) 
  同上述步驟a~d,但下層液吸出后,再以萃取稀釋液稀釋10倍(即下層液30ul加萃取稀釋液270ml)。 
  C、操作步驟 
  本產品的酶標記物與氯霉素標準溶液均直接使用,無需再稀釋。 
  1、于適當微孔中分別加入100mL標準溶液(0,0.05,0.15,0.45,1.35和4.05ppb)。 
  2、在另外的微孔中加入100mL 已完成前處理的樣品溶液。 
  3、再于每一微孔中另再加入50mL酶標記物。 
  4、輕敲盤子四周,使其充分混合后于室溫下避光靜置溫育1小時。 
  5、將微孔中的反應液甩掉,再將洗液加滿每一微孔后甩掉,重復洗3次。 
  6、zui后一次甩掉后,在吸水紙上拍干。 
  7、于每一微孔中加入底物溶液100mL后,輕敲盤子四周,使其充分混合。 
  8、于室溫下避光靜置溫育20分鐘。 
  9、于每一微孔中加入100mL反應終止液。 
  10、用酶標儀于波長450nm下判讀。 
  D、判定 
  1. 計算B/B0值。用樣品或標準液吸光度值(B)除以零標準吸光度值(B0)再乘以100%。 
  2. 以B/B0值為縱坐標,以標樣濃度的對數值為橫坐標,做標準半對數曲線。 
  3. 根據每個樣品的B/B0值就可從曲線上讀出相對應樣品的濃度。 
  4. 由于樣品經過了預先稀釋,因此根據標準曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數。 
  E、標準曲線 
  F、靈敏度 
  氯霉素試劑檢測盒的平均檢測下限為 0.05ppb,此濃度之吸光值與陰性標準溶液(0ppb)之吸光值有明顯的差異。 
  G、 特異性 
  針對以下抗生素進行交叉反應之測試,結果如下: 
  Chloramphenicol =100% 
  Chloramphenicol(free base) <0.1% 
  Gentamycin <0.1% 
  Tetracycline <0.1% 
  Penicillin G <0.1% 
  Sulfamethazine <0.1% 
  H、再現性 
  針對氯霉素檢測試劑盒精密度測試,重復6次,所得不同濃度標準溶液的吸光值變異系數(%CV).
  I、回收率 
  生乳(添加1.0ppb)104~117% 
  蜂蜜(添加0.3ppb)90~110% 
  蝦及魚肉(添加0.5ppb)95~110% 
  雞肉(添加0.5ppb) 90~120% 
  血清(添加0.5ppb)100~120% 
  內臟(添加1.0ppb) 100~120% 
  飼料(添加2.0ppb)80~110% 
  氯霉素檢測試劑盒 
  簡介 
  氯霉素(Chloramphenicol)是一種廣譜抗生素。由于其具有效果好以及價格低廉等優點,目前已被普遍應用于各類家禽、家畜、水產品及蜂制品的各種傳染性疾病的治療。然而氯霉素有其嚴重的副作用,它會抑制人體骨髓的造血功能,從而引起再生障礙性貧血和粒細胞缺乏癥。目前,我國已禁止其使用。 
  簡化了樣品處理方式,使用簡便,省時省力省錢,整個操作過程不到90分鐘。本產品檢測范圍廣(雞肉、魚、蝦、蟹、牛奶、血清、肌肉、組織、飼料與蜂蜜等),回收率為80%-120%,靈敏度可達到0.05ppb. 
  簡單 
  1. 樣品提取方便快捷。 
  2. 90分鐘得到結果。 
  3. 只需基本的實驗室設備。 
  4. 操作人員只需zui基本的實驗知識。 
  準確 
  1. 結果重現性高。 
  2. 至0.05ppb。 
  3. 與其它抗體的交叉反應率極低。 
  產品規格 
  包裝:每包96孔 
  靈敏度: 0.05ppb 
  測試區間:0.05ppb-4.05ppb 
  檢測時間:80分鐘(提取后) 
  儲存條件:2-8℃
  氯霉素快速檢測試紙(48條/盒) 型號:DP1 
  氯霉素(Chloramphenicol)是一種廣譜抗生素。由于其具有效果好以及價格低廉等優點,目前已被普遍應用于各類家禽、家畜、水產品及蜂制品的各種傳染性疾病的治療。然而氯霉素有其嚴重的副作用,它會抑制人體骨髓的造血功能,從而引起再生障礙性貧血和粒細胞缺乏癥。目前,我國已禁止其使用。 
  氯霉素檢測試紙,簡化了樣品處理方式,使用簡便,,整個操作過程只須15分鐘。靈敏度可達到3ppb
  其原理為:在試劑片的 ‘中央判讀區’噴有2條隱形的線,上面一條為對照線(C線),下面一條為測試線(T線)。若樣品中氯霉素的濃度小于3ppb,則T線呈色與C線相近;若樣品中氯霉素的濃度大于3ppb,則T線將比C線淺很多或*看不到線,也就是說,氯霉素濃度越高T線越淺。 
  簡單:
  1. 成套的裝置,提供準確一致的可視的結果
  2. 適于現場檢測。15分鐘得到結果。
  3. 操作人員只需zui基本的化驗知識。
  準確:
  1. 結果重現性高。
  2. 至3ppb。
  3. 與其它抗體的交叉反應率極低 
  
  我們為用戶提供zui方便、快捷、周到的服務。 
  產品規格
  包裝:每包16片
  靈敏度: 3ppb
  檢測時間:15分鐘(提取后)
  儲存條件:2-8℃ 
  組成 
  本試紙組可進行16次實驗 
  1、反應孔:2條16孔
  2、氯霉素指示劑:1瓶 
  3、檢測試紙片一筒 :16片 
  4、小吸管:24支 
  5、樣品混合棒:20根 
  6、10倍濃縮稀釋緩沖液:1瓶 
  試紙使用說明: 
  A、注意事項 
  1、 試紙需要干燥保存,請隨時確保瓶蓋蓋嚴 
  2、 測試環境溫度>20℃即可。 
  3、盡量不要觸摸試紙片中央在白色膜面。 
  4、本試紙使用前,需先將整套組成部分在室溫中回溫30分鐘,以確保反應的正確性。 
  5、檢測一個樣品使用一個反應孔,一片測試片及一支滴管。未用完的氯霉素指示劑,可放回4℃冰箱留待下次再用。未用過的微量測試孔,隔次仍可使用。 
  6、結塊或發臭的牛奶不適合檢測。 
  7、原倍稀釋緩沖液配制:用蒸餾水將10倍濃縮稀釋緩沖液以1:9的比例稀釋(即1mL濃縮液+9mL蒸餾水),即可作為樣品稀釋液。 
  B、樣品制備: 1.待測物為牛奶可直接進行檢測。 
  2.待測物為蜂蜜,則依以下方法進行處理: 
  以金屬勺取少量待測蜂蜜樣品置于火上加熱至沸騰,用小細管趁熱吸取樣品(勿吸入氣泡),以稀釋緩沖液做1:3稀釋。 
  3. 待測物為血清、則依以下方法進行處理: 
  a.抽取待驗動物血液,離心或靜置取其較透明之上層液(血清層)使用,注意不要有溶血。 
  b將3ml血清加入離心管中,再加入6 ml乙酸乙酯,震蕩混合約30秒。 
  c.離心10分鐘(3000rpm),取2ml上層液(乙酸乙酯)至玻璃管中,于50oC下氮氣吹干。 
  d.于此玻璃管中加入正己烷2ml,先將殘余物*溶解后,再加入1 ml 稀釋緩沖液,震蕩約30秒鐘。 
  e. 離心10分鐘(3000 rpm),用吸管吸去上層液(正己烷) 及中間乳化層部分,棄掉。再吸取下層液(水層)備用。 
  f.若有乳化現象,請先將大部分上層液(正己烷)取出后,再將玻璃管置入80oC水中,隔水加熱約5~10分鐘,可改善乳化情形。 
  4. 待測物為雞肉或魚、蝦,則依以下方法進行處理: 
  a.將3克樣品剪碎后放入50 ml離心管中,再加入6 ml乙酸乙酯,并以均質機均質約1分鐘,再震蕩約30秒。 
  b.離心10分鐘(3000rpm),取2ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中,于50oC下氮氣吹干。 
  c.于此玻璃管中加入正己烷2ml,先將殘余物*溶解后(若未能*溶解,可能會導致回收率降低),再加入1ml稀釋緩沖液,震蕩約30秒鐘。 
  d.離心10分鐘(3000 rpm),用吸管吸去上層液(正己烷) 及中間乳化層部分,棄掉。再吸取下層液(水層)備用。 
  e.若有乳化現象,請先將大部分上層液(正己烷)取出后,再將玻璃管置入80oC水中,隔水加熱約5~10分鐘,可改善乳化情形。 
  5.待測物為內臟(肝、心等),則依以下方法進行處理(5倍稀釋): 
  同上述步驟a~d,但下層液吸出后,再以稀釋緩沖液稀釋5倍(即下層液100μl加 稀釋 緩沖液400ul)。 
  6.待測物為飼料,則依以下方法進行處理(10倍稀釋): 
  同上述步驟a~d,但下層液吸出后,再以稀釋緩沖液稀釋10倍(即下層液100μl加 稀釋 緩沖液900ul)。 
  C、操作步驟: 
  (若樣品不只一份,請先為樣品及反應孔做好對應編號) 
  1.以小吸管在微量測試孔中依次加入兩滴待測的樣品(以小吸管吸取時,須將*滴滴除后,再進行實驗步驟)。 
  2.充分搖勻氯霉素指示劑,以新的滴管吸取氯霉素指示劑,滴去前兩滴,加入一滴指示劑于待測樣品的測試孔。 
  3.以手輕輕握住微孔,貼著桌面震蕩使其混合均勻約5分鐘。 
  4.于每個測試孔中放入試紙片(白色端在下)。 
  5.靜置10分鐘后判讀結果(判讀結果時間不要超過20分鐘)。 
  D、判讀: 
  (由于樣品經過了預先稀釋,因此所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數) 
  情形1—T線比C線深,或一樣深,表示樣品中氯霉素濃度低于3ppb。 
  情形2—T線比C線淡,表示樣品中氯霉素濃度高于3ppb。 
  情形3—若C線*沒出現,則表示測試失敗。

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