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液相色譜法與液相色譜儀

更新時間:2017-02-15      點擊次數:1798
液相色譜法是20世紀60年代末在經典液相色譜的基礎上發展起來的一種現代色譜分析方法,歷*曾出現過不同的叫法,如,高壓液相色譜(HPLC)、高速液相色譜(HSLC)和高分辨液相色譜(HRLC)。就分離原理而言,HPLC與經典柱層析(色譜)沒有本質的區別,但由于采用了高壓輸液泵、微粒固定相和高靈敏度檢測器,HPLC在分析速度、分離效率、檢測靈敏度和操作自動化方面,都達到了可與GC相比的程度,并保持了樣品適用范圍廣、流動相種類多和便于制備的柱層析優點,在生物工程、制藥工業、食品工業、環境監測和石油化工等領域獲得了廣泛的應用! HPLC的特點:①樣品適用范圍廣;②分離效率高;③檢測靈敏度高;④分析速度快;⑤樣品回收方便; 液相色譜法的分類:HPLC的分類方法有多種,比較常見的有三種:(1)按照分離機理分類:①吸附色譜②分配色譜③離子交換色譜(IEC)④體積排阻色譜(SEC)⑤親和色譜(AC)(2)按照色譜柱洗脫動力學分類:①洗脫法②前沿法③置換法(3) 按照分離目的分類:①分析液相色譜②制備液相色譜 HPLC分析常用的樣品處理技術:粉碎、冷凍干燥、氣體萃取(頂空分析和吹掃-捕集)、溶劑萃取(回流或索氏萃取,加壓溶劑萃取)、固相萃取、固相微萃取、超臨界流體萃取、微波萃取、超聲波萃取、微透析、衍生化、膜分離、蒸餾、吸附、離心、過濾、濃縮和溶解等。 色譜定性分析方法標準物質對照定性;利用文獻數據定性;利用選擇性檢測器定性;在線聯用儀器定性;其它定性方法; 液相色譜儀使用及維護方法液相色譜儀使用時要非常注意!使用卡套柱時,兩端的卡套應時刻連接在柱芯上。不管您是平衡色譜柱或是清洗,任何時候都不能將卡套取下來,否則會造成填料的流失。 液相色譜柱使用注意:卡套柱的安裝(加預柱):將卡套架套入柱芯將兩片夾套片嵌入柱芯的凹槽,使夾套高于柱芯將已套到柱芯上的卡套架向上推,直至高過夾套片將“子彈頭"預柱放入卡套片內將卡套帽和卡套架旋在一起,然后用手擰緊然后依同樣的順序連接好柱子的另一端平衡色譜柱 反相色譜柱在經過出廠測試后是保存在乙腈/水中的。請一定確保您所使用的流動相和乙腈/水互溶。由于色譜柱在儲存或運輸過程中可能會干掉,因此在用流動相分析樣品之前,應使用10~20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱;如果您所使用的流動相中含有緩沖鹽,應注意用純水“過渡"。硅膠柱或極性色譜柱在經過出廠測試后是保存在正庚烷中的。如果該色譜柱需要使用含水的流動相,請在使用流動相之前用乙醇或異丙醇平衡如何平衡色譜柱?平衡過程中,將流速緩慢地提高用流動相平衡色譜柱直到獲得穩定的基線(緩沖鹽或離子對試劑度如果較低,則需要較長的時間來平衡)色譜柱的再生。。。進行色譜柱再生時,應使用一個廉價的泵,我們建議不使用您的液相色譜儀上的泵。 注意:在對NH2改性的色譜柱進行再生時,由于NH2可能成銨根離子的形式存在,因此,應該在水洗后用0.1M的氨水沖洗,然后再用水沖洗至堿溶液*流出。如果簡單的有機溶劑/水的處理不能夠*洗去硅膠表面吸附的雜質,用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。 液相色譜的常用術語1.色譜曲線(chromatogram):在色譜法中,當樣品加入后,樣品中各組分隨著流動相的不斷向前移動而在兩相間反復進行溶解、揮發,或吸附、解吸的過程。如果各組分在固定相中的分配系數(表示溶解或吸附的能力)不同,就有可能達到分離。分配系數小的組分滯留在固定相中的時間短,在柱內移動的速度快,先流出柱子;分配系數大的組分滯留在固定相中的時間長,在柱內移動的速度慢,后流出柱子;分離后的各組分經檢測器轉換成電信號而記錄下來,得到一條信號隨時間變化的曲線,稱為色譜流出曲線或 “色譜峰",理想的色譜流出曲線應該是正態分布曲線。2.(色譜)峰(chromatographic peak):色譜柱流出組分通過檢測器系統時所產生的響應信號的微分曲線。3.峰底(peak base):峰的起點與終點之間的連接的直線。4.峰高(h,peak height):色譜峰zui大值點到峰底的距離。5.峰寬(W ,peak width):在峰兩側拐點處所作切線與峰底相交兩點的距離。6.半高峰寬(Wh/2 ,peak with d at half height):通過峰高的中點作平行于峰底的直線,此直線與峰兩側相交兩點之間的距離(圖1 中的HJ)。7.峰面積(A ,peak area):峰與峰底之間的面積(圖1中的CHEJDC)。8.拖尾峰(tailing peak):后沿較前沿平緩的不對稱的峰。9.前伸峰(leading peak):前沿較后沿平緩的不對稱的峰。(又叫伸舌峰、前延峰)10.假峰(ghost peak):除組分正常產生的色譜峰外,由于儀器條件的變化等原因而在譜圖上出現的色譜峰,即并非由試樣所產生的峰。這種色譜峰并不代表具體某一組分,容易給定性、定量帶來誤差。(又叫鬼峰)11.畸峰(distrorted peak):形狀不對稱的色譜峰,前伸峰、拖尾峰都屬于這類。 12.反峰(negative peak):也稱倒峰、負峰,即出峰的方向與通常的方向相反的色譜峰。

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